人無(wú)孢蛋白(ASPN) elisa試劑盒是一種用于檢測(cè)ASPN蛋白的常用實(shí)驗(yàn)工具。通過(guò)ELISA原理,該試劑盒能夠準(zhǔn)確測(cè)定樣本中ASPN蛋白的含量。它包含了預(yù)包被的96孔板、標(biāo)準(zhǔn)品、抗ASPN酶標(biāo)記二抗、底物溶液和停止液等組分。科學(xué)家可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算出待測(cè)樣本中ASPN蛋白的濃度,從而研究ASPN蛋白在生物體發(fā)育和疾病發(fā)展中的作用。
1.預(yù)包被的96孔板:每孔涂有特異性抗ASPN抗體,用于捕獲ASPN蛋白。
2.標(biāo)準(zhǔn)品:系列稀釋的已知ASPN蛋白濃度,用于生成標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)其光密度與待測(cè)樣本光密度進(jìn)行比較,計(jì)算樣本內(nèi)ASPN濃度。
3.抗ASPN酶標(biāo)記二抗:能夠與ASPN特異性結(jié)合,并與酶標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合形成免疫復(fù)合物。
4.底物溶液:能夠與酶標(biāo)記物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng),生成顯色產(chǎn)物,通常為TMB(3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺)。
5.停止液:停止底物的反應(yīng),保持反應(yīng)結(jié)果的穩(wěn)定。
使用人無(wú)孢蛋白(ASPN) elisa試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)通常需要按照以下步驟進(jìn)行:
1.取出所需的標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本,將標(biāo)準(zhǔn)品依次加入已預(yù)裝96孔板中的標(biāo)準(zhǔn)品孔,將待測(cè)樣本加入示例孔。
2.加入特異性抗ASPN抗體的孔板蓋密封,孵育一段時(shí)間使ASPN與抗體結(jié)合。
3.倒置孔板,輕輕拍打洗滌孔中未結(jié)合的物質(zhì)。
4.加入抗ASPN酶標(biāo)記二抗,孵育一段時(shí)間,使其與ASPN特異性結(jié)合。
5.再次洗滌孔板以去除未結(jié)合的物質(zhì)。
6.加入底物溶液,使酶標(biāo)記物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)并產(chǎn)生顯色。
7.使用酶標(biāo)儀讀取各孔的光密度,并將結(jié)果轉(zhuǎn)化為ASPN蛋白的濃度。